Como Se Hace La Tincion De Gram

Nuestra profesora Susana Estrada nos explicar la técnica Tinción de Gram, ese conocimiento eliminar imprescindible tanto hacia los alumno de Técnico ese Dietética como para los alumno de habilidad Superior del Laboratorio Clínico y Biomédico.

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¿En qué consiste en la Tinción del Gram?

La Tinción de Gram rapé una técnica ese laboratorio desarrollada por Christian Gramen el años 1884. El objetivo de Gram era llegar una prueba con la que el fin posible distinguir diferentes grupos del bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas.

Según la distribución de peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen de una manera u otra.

Así, los bacterias que no se tiñen mediante esta habilidad se denominan Gram negativas. Lo es formadas por una pared además fina formación por menos capa de peptidoglicano y laa segunda membrana rica dentro lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras.

El cristal violeta se une a la pared bacteriana y se estabiliza alcanzan el lugol. La mezclado alcohol-acetona disuelve la membrana externa ese las bacterias Gram negativas (más fina que la del las Gram positivas) extrayéndose los cristal violeta. Del se tiñen solo las Gram negativas alcanzar safranina.

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Siempre que “destapemos” la a placa alcanzan colonias, deberá hacerse en condiciones de esterilidad. Para obtener estas hacha podemos utilizar un mechero Bunsen o ns mechero del alcohol. Alcanzar el mechero, conseguiremos los se forme un entorno de esterilidad alrededor de la llama, de lo tanto, correcto trabajamos cerca del mechero, vamos a tener un entorno estéril.

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A la hora después comenzar alcanzan la tinción, lo primero que allí que realizar denominaciones un frotis de microorganismo, para eso hay que incorporar una gota pequeña ese agua destilada (cuanto más alto sea la gota, tardará hasta luego tiempo dentro de secarse).

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Debemos coger la muestra alcanzan el resolver bacteriológica anterior esterilizada. Para eso encendemos el mechero de alcohol y ponemos el asa en localización vertical para del mechero elevándose que el hilo ese extremo del resolver se quede totalmente incandescente.

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Después debemos aguardar a los se enfríe causado si tocamos con el hilo brillante las colonias podemos matar al microorganismo.

Abrimos la placa alcanzan las bacterias y alcanzar el resolver tocamos dentro el agar para comprobar que éste está frío.

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A continuación, cogemos unas colonias de las bacterias y las extendemos encima la gota del agua destilada.

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Una vez extendido, volvemos ns esterilizar el asa, ya que todo material debe cantidad esterilizado previamente volver a oveja guardado. Ns continuación, lo ese tenemos que dar es fijar la muestra, la como se pueden fijar alcanzan metanol o se puede fijar alcanzan calor. Dentro este circunstancias utilizaremos la permanente por calor.

Tenemos que hacer movimientos circulares o dentro zig zag por para de la contar del mechero, levantando continuamente la me muestro para que cuales se nosotros queme los tiempo adecuada para que la show quede completamente seca y entonces fijada.

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Una vez fijada la exhibida apagamos los mechero de seguridad.

Ahora, vamos uno teñir nuestra siembra después microorganismos dentro de el portaobjeto con diferentes tipos ese tinciones para logros visualizar cada microorganismo (bacteria) al microscopio.

Las tinciones se realizan dentro un cristalizador, también utilizamos varillas de tinciones y los porta con la muestra.

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Vamos un utilizar diferente reactivos hacía la tinción. Dentro primer lugar los cristal violeta, en segundo lugar el lugol,

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usaremos ~ alcohol del 96º (el decolorante puede okey formado por la a mezcla después alcohol, alcohol-acetona y por diferente mezclas),

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y final la safranina.

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¿Qué va uno ocurrir? ns bacterias gram positivas y ns bacterias gram negativas tienen diferente grosor en el peptidoglicano de su pared celular, de semejante forma que si echemos los cristal púrpura se nosotros van a tenido tanto ns gram positivas qué las gram negativas. Ns lugol lo los hará, eso fijar los colorante después cristal púrpura a ns bacterias, alcanzar el alcohol (o mezcla decolorante), lo los haremos será eliminar ns cristal violeta del las gram negativas y vía último, la safranina, va uno teñir mostrar a los gram negativas que son las que eso es correcto decoloradas. Por lo tanto, las gram positivas van a estar teñidas ese cristal violeta y ns gram negativas del safranina (color fucsia).

El protocolo será aplicar a los bacterias fijadas cristal violeta durante uno minuto, después lavar con el frasco lavador. Ns continuación, agregar lugol durante un minuto, volver a lavar con el frasco lavador. Después, incorporar durante diez o quince segundos la mezcla después alcohol o alcohol-acetona…, lavar la muestra alcanzar el frasco lavador. Y finalmente, agregar safranina a lo largo de un minuto y lavar alcanzar agua destilada.

Por lo tanto, tal y como hemos dicho, aplicamos los cristal violeta.

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Una vez que ha transcurrido ns minuto lo lavamos con agua destilada.

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Ahora vamos a agregar el lugol ajustamiento por acerca de la ámbito de la me muestro y aguardamos otro minuto.

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Ya ha transcurrido ns minuto y lavamos con agua destilada. Ahora decoloraremos la muestra alcanzar el alcohol. Para lograrlo hay ese incorporar ns porta ese un lado hacia ir agregando el alcohol y ese vaya resbalando hacía abajo. Cada protocolo estípula un tiempo pero con quince segundos aproximadamente la muestra quedará decolorada.

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Tras los quince segundos de decoloración, aclararemos alcanzan agua destilada a ~ que ns alcohol alguna siga actuación, causada si alguno paramos el proceso después decoloración a tiempo, todas ns bacteria quedarían decoloradas, alguna solamente ns gram negativas y por lo tanto no podríamos distinguir unas después otras.

Por último, aplicamos un la me muestro la safranina y lo dejamos comportamiento durante es diferente minuto.

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Transcurrido el minuto, volvemos a escapar la muestra con agua destilada y dejaríamos ese la muestra se secara.